Микотоксикологическая оценка комбикормов для бройлеров: многолетний анализ пяти микотоксинов на румынском комбикормовом заводе

Микотоксины – вторичные метаболиты мицелиальных грибов, которые наносят огромный ущерб сельскому хозяйству во всем мире и представляют собой серьезную проблему для здоровья людей и животных. Целью этого пятилетнего исследования было изучение загрязнения комбикорма для цыплят-бройлеров на всех стадиях (стартового, ростового и откорма) с комбикормового завода в Румынии микотоксинами, такими как общие афлатоксины (АФТ), дезоксиниваленол (ДОН), фумонизины (ФУМ), охратоксин А (ОТА) и зеараленон (ЗЕН).

АФТ был обнаружен в 49,3–72,2% образцов с концентрацией от 0,01 до 5,2 мкг/кг. ДОН был обнаружен в 77,6–98,9% образцов с максимальной концентрацией от 330 до 1740 мкг/кг. Загрязнение FUM варьировалось от 42,7% до 87,2%, с максимальными уровнями от 460 до 1400 мкг/кг. OTA присутствовал в 44,2–87,9% образцов, с максимальными концентрациями, достигающими 21,4 мкг/кг. ZEN был стабильно повышен на всех стадиях кормления, обнаруживаясь в 86,5–97,4% образцов, с максимальными уровнями 89,4 мкг/кг. Сочетание микотоксинов было частым явлением в образцах, при этом наиболее распространенная комбинация из четырех микотоксинов встречалась в 38,51% образцов. Образцы отбирались из бункеров для хранения, гомогенизировались и анализировались в сертифицированных лабораториях, при этом процедуры отбора проб варьировались в зависимости от размера партии для обеспечения репрезентативности. Особенно актуально исследование перехода микотоксинов в продукты животного происхождения и комбинированного воздействия микотоксинов на здоровье животных, включая потенциальные синергические или антагонистические взаимодействия. В этом исследовании подчеркивается важная роль комплексного и постоянного мониторинга микотоксинов в защите здоровья животных и безопасности пищевых продуктов.

Безопасность пищевых продуктов и кормов представляет собой серьезную проблему для здоровья как животных, так и человека из-за частого загрязнения пищевых продуктов и кормов различными загрязняющими веществами [ 1 , 2 ].

Слово «микотоксин» происходит от греческих слов «myco» и «toxin», означающих «плесень» и «яд», вырабатываемые живым организмом [ 3 ]. Микотоксины представляют собой группу токсичных химических соединений, продуцируемых в качестве вторичных метаболитов некоторыми видами плесневых грибов, в основном родов Aspergillus , Fusarium и Penicillium [ 4 , 5 , 6 ].

На основании литературных данных общая распространенность микотоксинов в пищевых культурах сильно варьируется в зависимости от многих факторов, таких как рассматриваемый микотоксин, используемые аналитические методы и представление результатов, но сообщается, что распространенность обнаруженных микотоксинов достигает 60–80% [ 7 ], и это считается неизбежной и непредсказуемой проблемой, которая представляет угрозу безопасности пищевых продуктов [ 8 ].

Загрязненные корма и пищевые продукты представляют высокий риск для здоровья животных и метаболических состояний человека, которые могут варьироваться от острых симптомов тяжелого заболевания до долгосрочных последствий [ 9 , 10 , 11 ]. Из-за случаев отравления микотоксинами [ 12 , 13 ] в большинстве стран или регионов имеются нормативные уровни присутствия микотоксинов в определенных основных продуктах питания или кормах; поэтому требуется тестирование на эти конкретные регулируемые микотоксины [ 14 ] с использованием специфических и выборочных аналитических методов, адаптированных для проверки безопасности пищевых продуктов и защиты общественного здоровья [ 3 ]. Максимальные уровни или рекомендуемые уровни микотоксинов в продуктах, предназначенных для корма животных в Европейском союзе, приведены в таблице 1 , так как они были найдены в упомянутой законодательной поддержке [ 15 , 16 ].

Афлатоксины (АФТ) представляют собой класс канцерогенных микотоксинов, продуцируемых видами Aspergillus, особенно Aspergillus flavus и A. parasiticus [ 17 , 18 , 19 ]. Когда зерновые, такие как кукуруза, выращиваются в среде с высокими температурами окружающей среды (день > 32 °C; ночь > 24 °C), зерна становятся более восприимчивыми к образованию афлатоксина. Зерна кукурузы могут содержать до 400 000 мкг/кг афлатоксина, поэтому отбор проб очень важен при анализе уровней загрязнения [ 5 ]. Все первичные превращения афлатоксина B 1 включают преобразование в гидроксильные метаболиты, наиболее важным из образующихся токсинов с точки зрения токсичности является афлатоксин M 1 . Афлатоксин B 1 оказывает иммунодепрессивное действие на животных, особенно сильно влияя на клеточный иммунитет. Согласно исследованиям экспертов, афлатоксин B 1 является генотоксикантом, вызывающим генетические мутации и хромосомные изменения [ 19 ].

Исходя из того, что нам известно на данный момент, присутствие АФТ в корме приводит к подавлению иммунного ответа у птиц, возникновению окислительного стресса и нарушению активности печеночных ферментов [ 20 ]. Кроме того, недавнее исследование подчеркивает последствия длительного воздействия АФБ 1 , которые могут привести к снижению плотности костей у цыплят-бройлеров не только из-за нарушения усвоения витамина D или кальция и фосфора, но и сам микотоксин в концентрации 230 мкг/кг вызывает снижение костной массы у домашней птицы [ 21 ].

Дезоксиниваленол (ДОН), также известный как вомитоксин, вырабатывается Fusarium geaminearum и, в некоторых географических районах, F. culmorum [ 22 ]. Основными поражаемыми культурами являются кукуруза и мелкие зерновые, такие как пшеница, овес и ячмень. У кукурузы «стеблевая и колосовая гниль», вызываемая F. graminearum, может проявляться в виде фиолетовых или розовых зерен с видимыми розовыми наростами плесени на пораженных участках початка. Хранение в оптимальных условиях (влажность <14%) минимизирует дальнейшее производство токсинов патогенными грибами [ 5 ]. Загрязнение корма ДОН даже в низких концентрациях, ниже 1900 мкг/кг, может привести к серьезным кишечным патологиям, согласно текущим исследованиям, влияя не только на морфоструктурную активность кишечных ворсинок бройлеров, но и, возможно, приводя к снижению реакции пищеварительных ферментов [ 23 ].

Фумонизины (ФУМ) включают в себя группу относительно недавно открытых микотоксинов (в основном фумонизины B1 , B2 и B3 ) , в основном вырабатываемых F. verticillioides и F. proliferatum , причем кукуруза является основным затронутым товаром [ 24 ]. Зерна, поврежденные насекомыми, птицами или треснувшими зернами, часто содержат самые высокие уровни токсина и вызывают серьезные заболевания у животных [ 25 ]. В отчетах по всему миру зарегистрированы уровни загрязнения фумонизином B1 в ppm . Воздействие на человека происходит на уровнях от микрограммов до миллиграммов в день и является самым высоким в регионах, где продукты из кукурузы являются основным продуктом питания. На основании токсикологических данных МАИР (Международное агентство по изучению рака) классифицировало фумонизин B1 как возможно канцерогенный для человека (группа 2B) [ 26 ].

Охратоксин А (ОТА) является естественным флуоресцентным соединением, и его обнаружение во время анализа обычно основано на этом свойстве [ 5 ]. После афлатоксинов охратоксин А представляет собой наиболее значимый микотоксин с точки зрения его воздействия. ОТА продуцируется представителями родов Aspergillus ( A. ochraceus, A. carbonarius ) и Penicillium ( P. verrucosum ). Было замечено, что загрязнение ОТА является глобальным явлением, о чем свидетельствуют исследования [ 27 , 28 ]. Первоначальный рост грибка в злаках может привести к достаточному количеству влаги за счет метаболизма, что позволяет дальнейший рост и образование микотоксина. Следовательно, токсин может все еще присутствовать в зерновых продуктах, тем самым подвергая популяции людей и животных загрязнению [ 5 ].

МАИР классифицировало охратоксин А как вещество группы 2B, возможно канцерогенное для человека, на основании определенных показателей канцерогенности, установленных на экспериментальных животных [ 29 ].

Зеараленон (ЗЕН) — это микотоксин, продуцируемый несколькими видами Fusarium , в частности F. graminearum , F. culmorum , F. cerealis , F. equiseti , F. verticillioides и F. incarnatum [ 30 ], который может вызывать ряд заболеваний у животных [ 31 ]. Он обычно встречается в кукурузе, но может быть обнаружен и в других культурах, таких как пшеница, ячмень, сорго и рожь. В целом, Fusarium особенно процветает и заражает сельскохозяйственные культуры в условиях влажной и холодной погоды. Хотя ЗЕН в первую очередь является загрязнителем полевых культур, развитие токсина также может происходить при ненадлежащих условиях хранения [ 32 ]. В 2000-х годах политика Европейского союза в области безопасности пищевых продуктов была переформулирована в соответствии с подходом интегративной концепции «от фермы до вилки», что гарантирует высокий уровень безопасности пищевых продуктов на всех этапах производственной цепочки [ 33 ]; Даже комбикормовые заводы, как и пищевые предприятия, должны иметь программы автоматического контроля загрязняющих веществ [ 34 , 35 ].

Сырьё, такое как зерновые, масличные семена, бобовые и, в частности, комбикорма как сложные матрицы, подвержено загрязнению бактериальными или грибковыми микотоксинами [ 36 ]. Например, исследование, проведённое в Польше, показывает, что комбикорма для бройлеров характеризуются более высоким уровнем загрязнения микотоксинами, в основном относящимися к группе трихотеценов; корма для откорма и финишного откорма характеризуются более высоким содержанием бактерий и грибков по сравнению со стартовыми кормами [ 37 ].

Учитывая включение производства комбикормов в пищевую цепь, текущее исследование подчеркивает наличие пяти микотоксинов, таких как АФТ, ДОН, ФУМ, ОТА и ЗЕН, в образцах, отобранных в течение 5 лет на комбикормовом заводе на севере Румынии. Полученные результаты сравнивались с результатами, полученными другими национальными и международными исследователями, а также было выявлено и обсуждено присутствие более одного микотоксина в исследуемом комбикорме. Хотя факторы окружающей среды (такие как засуха или сильные дожди) и изменение климата повлияли на географическую область, указанную в этом исследовании, значения микотоксинов, обнаруженные в образцах, не превысили законодательно установленных пределов, предложенных Европейской комиссией. Помимо выявления потенциальных новых микотоксинов, в будущих исследованиях будет изучено, как они влияют на здоровье животных и как они сосуществуют в кормах для животных.

2.1 Образцы кормов

Комбикорма особенно подвержены загрязнению множественными микотоксинами, поскольку они представляют собой смесь нескольких видов сырья [ 10 , 38 ].

Образцы комбикорма для бройлеров на стартовом, ростовом и финишном этапах были получены с румынского комбикормового завода, производительность которого составляет 85 000 тонн в год, что является репрезентативным показателем производства кормов в стране. В 2019 году было проанализировано 284 образца комбикорма (92 образца для стартового, 79 образцов для ростового и 113 образцов для финишного периода), в 2020 году – 241 образец (91 образец для стартового, 87 образцов для ростового и 143 образцов для финишного периода), в 2021 году – 306 образцов (98 образцов для стартового, 82 образцов для ростового и 126 образцов для финишного периода), в 2022 году – 333 образца (102 образца для стартового, 97 образцов для ростового и 134 образцов для финишного периода), а в 2023 году – 350 образцов (95 образцов для стартового, 103 образцов для ростового и 152 образцов для финишного периода). Образцы комбинированных кормов были взяты из бункеров хранения комбикормового завода и отправлены в заводскую лабораторию для анализа.

Для анализа комбикорма вручную с помощью кельмы отбирали 4, 7, 11 и 14 инкрементальных проб из партий весом 24, 48, 72 и 96 тонн. Размер партии определял общее количество отобранных элементарных проб, которые затем разделялись и гомогенизировались с помощью центробежного механического делителя для создания лабораторной пробы. Размер инкрементальной пробы составлял минимум 3 кг, а объединенная проба получалась путем уменьшения инкрементальной пробы до минимума 0,5 кг. Образцы корма анализировались как таковые. Полученные результаты интерпретировались на основе сухого вещества 88% (влажность 12%) для сравнения с максимально допустимыми пределами, установленными в законодательстве Европейского Союза, представленными в Таблице 2 .

2.2. Оборудование, используемое для обнаружения

Наборы для определения микотоксинов содержали следующее: спектрофотометр для микротитровальных планшетов (450 нм); мерный цилиндр (стекло) на 100 мл и 250 мл; стеклянную посуду для приготовления экстракта образца: фильтровальную воронку и колбу на 50 мл; микропипетки на 20 мкл, 200 мкл и 1000 мкл; микропипетки на 50 мкл, 100 мкл и 1000 мкл; фильтровальную бумагу: Whatman № 1; весы (диапазон измерений не менее 50 г и точность ±0,01 г); центрифугу (не менее 3500× g ) + центрифужные пробирки с крышкой (центрифужные пробирки на 50 мл); вихревой смеситель с 8-канальной пипеткой на 50, 100 и 300 мкл; измельчитель (мельница); шейкер; Ultra-Turrax.

2.3 Интегрированная система менеджмента и обучения персонала

На комбикормовом заводе, рассматриваемом в исследовании, предотвращение несоответствий на всех этапах под контролем организации достигается путем поддержания и постоянного повышения эффективности интегрированной системы менеджмента в соответствии с требованиями указанных стандартов: SR EN ISO 9001:2015, SR EN ISO 22000:2019 и SR ISO 45001:2018 [ 39 , 40 , 41 ]. В соответствии с вышеперечисленными стандартами учреждение обязано разрабатывать и соблюдать специальные процедуры по качеству и безопасности пищевых продуктов. В этой связи все члены команды, которые использовали набор RIDASCREEN-FAST, были обучены с помощью документированных процедур (процедура по методам отбора проб для лабораторных исследований; процедура по количественному определению микотоксинов). Обучение включало как теоретические аспекты (технические принципы набора и микотоксины, которые будут анализироваться), так и практические аспекты (правильное использование набора, обращение с лабораторным оборудованием, соблюдение процедур безопасности). Обучение представляло собой непрерывный процесс, который включал в себя сессии подведения итогов и периодические оценки эффективности работы персонала с целью обеспечения того, чтобы персонал был в курсе обновлений протоколов.

2.4 Анализ микотоксинов

Количественное определение микотоксинов проводилось в соответствии с аналитическим методом, описанным в технических руководствах по иммуноферментному анализу RIDASCREEN® FAST , предоставленных компанией R-Biopharm AG, Дармштадт, Германия. Уровни контаминации АФТ представляют собой сумму АФБ 1 , АФБ 2 , АФГ 1 и АФГ 2 , а ДОН и ФУМ – сумму ФБ 1 и ФБ 2 , а ОТА и ЗЕН в образцах измерялись с помощью отдельных лабораторных наборов RIDASCREEN® FAST .

Методы экстракции для определения микотоксинов различаются в зависимости от конкретного анализируемого токсина. Общие афлатоксины и фумонизины экстрагируют с использованием 70% метанола, после чего 5,0 г измельченного образца смешивают с 25,0 мл метанола. Экстракт тщательно перемешивают в течение трех минут, а затем фильтруют через фильтровальную бумагу. Полученный фильтрат затем разбавляют дистиллированной водой, содержащей 1,3 мл фумонизина и 1 мл афлатоксина. Однако экстракционные растворители различаются для дезоксиниваленола, охратоксина А и зеараленона. DON экстрагируют встряхиванием 5,0 г образца со 100 мл дистиллированной воды, тогда как для охратоксина А требуется 50,0 мл разбавленного экстрактора ECO. ZEN также использует 70% метанол, как и AFT, но с другой пропорцией разбавления.

В случае инкубации и промывки тест на АФТ требует 10-минутной инкубации со смесью фермента и антител при комнатной температуре (20–25 °C), тогда как для ДОН, ФУМ и ЗЕН обычно требуется 5-минутная инкубация. ОТА требует более сложной экстракции с 5-минутным этапом смешивания и последующим центрифугированием, что отличает его от других микотоксинов с точки зрения подготовки образца.

Промывание лунок проводят 250 мкл буферного раствора, повторяя процедуру дважды, и она одинакова для всех определяемых микотоксинов. После промывания каждую лунку обрабатывают 100 мкл субстрата/хромогена и инкубируют в течение различных промежутков времени: 3 мин для DON, FUM и OTA и 5 мин для AFT и ZEN, все при комнатной температуре в темноте. После этой инкубации в каждую лунку добавляют 100 мкл стоп-раствора и измеряют поглощение при 450 нм. Для большинства микотоксинов поглощение обычно считывают через 10 мин после добавления стоп-раствора. В случае OTA время считывания немного увеличивается, снова до 15 мин.

2.5 Статистический анализ

Полученные в ходе анализа данные были статистически обработаны и интерпретированы. Были определены минимальное и максимальное значения, а также оценочные показатели положения и дисперсии, среднее арифметическое (x) и стандартное отклонение (s) были рассчитаны для образцов с положительными результатами. Средние значения и стандартные отклонения были рассчитаны с помощью Microsoft Excel 2016 [ 42 ]. Статистический дисперсионный анализ (ANOVA) был проведен с помощью программы GraphPad Prism (9.3.0) для сравнения уровней каждого микотоксина в различных типах кормов и среднегодовых значений.

Концентрации АФТ, ДОН, ФУМ, ОТА и ЗЕН в стартовом комбикорме представлены в таблице 3 .

Согласно полученным результатам, наиболее выраженное загрязнение в случае АФТ произошло в 2022 году, когда было протестировано большинство образцов кормов. Однако наиболее значительное загрязнение по количеству протестированных образцов, с высокими максимальными значениями 4,6 или даже 4,8, пришлось на 2019 и 2020 годы. Кроме того, в 2020 году мы наблюдали массовое загрязнение образцов микотоксином ДОН, достигавшее максимума 1120 мкг/кг. При таком же подходе к соотношению положительных образцов к количеству исследованных образцов, 2019 год является наиболее значимым годом для загрязнения стартовых комбикормов бройлеров ФУМ и ОТА.

В таблице 4 приведены результаты, полученные для кормов для выращивания животных с точки зрения уровня загрязнения всеми исследованными микотоксинами.

Рассматривая результаты и применяя то же правило отчетности по проценту положительных образцов к количеству исследованных образцов корма для животных, мы видим, что уровни АФТ, ДОН и ЗЕН были самыми высокими в 2019 и 2020 годах. Уровни ФУМ и ОТА были зафиксированы более высокими в 2021 и 2022 годах.

Результаты микотоксикологической оценки комбикорма для откорма представлены в таблице 5. Анализируя результаты и применяя то же правило соотношения процента положительных проб к общему количеству исследованных проб комбикорма для откорма, мы отмечаем значительное загрязнение всеми микотоксинами в 2019 и 2020 годах, при этом загрязнение достигало максимальных значений 1510 мкг/кг для ДОН в 2020 году или 1080 мкг/кг для ФУМ в 2019 году.

Пятилетнее исследование загрязнения комбикормов для бройлеров микотоксинами выявило сложную картину совместного присутствия нескольких микотоксинов, как показано на рисунке 1. Наиболее часто встречалось одновременное присутствие четырёх микотоксинов, обнаруженных в 38,51% образцов. Полученные данные указывают на риск множественного загрязнения комбикормов для бройлеров микотоксинами, при этом наблюдается широкий спектр комбинаций их совместного присутствия.

Эти комбикорма содержат различные пропорции сырья для обеспечения разного уровня питательных веществ, при этом основным компонентом всегда являются злаковые. Результаты дисперсионного анализа не выявили значимых различий ( p < 0,05) в уровнях каждого микотоксина в зависимости от типа корма и среднегодовых значений. Высокая доля злаковых во всех этих комбикормах может объяснять отсутствие различий. Тем не менее, ожидается, что стартовый комбикорм будет менее загрязненным, чем финишный, вероятно, из-за меньшего количества кукурузы, используемой в составе для молодняка птицы, поскольку именно кукуруза является основным источником загрязнения микотоксинами.

Комбикорма для бройлеров представляют собой сбалансированные кормовые формулы, содержащие различные ингредиенты для обеспечения полноценного и здорового питания. Основные кормовые компоненты включают: кукурузную и пшеничную муку — используются для обеспечения углеводов, белка и клетчатки; соевый и подсолнечный шрот — концентраты растительного белка; растительные масла (например, подсолнечное масло) — источники жиров, которые необходимы для энергии и общего здоровья цыплят; соль — добавляется для баланса уровня натрия; минералы (кальций, фосфор, магний и т. д.) — необходимы для развития костей и нервной системы; витамины (A, D3, E, B) — помогают поддерживать иммунную систему и предотвращать дефициты; растительные волокна (например, пшеничные отруби) — помогают правильному функционированию пищеварительной системы. Точный состав комбикорма варьируется в зависимости от возраста цыпленка, стадии роста и производственных целей. Как правило, комбикорма для бройлеров разрабатываются таким образом, чтобы обеспечить быстрый и эффективный рост, сохраняя при этом здоровье птицы.

Микотоксины в кормах представляют собой значительную проблему для безопасности животных и человека, и недавние исследования показали, что загрязнение пищевых продуктов и кормов является скорее правилом, чем исключением, затрагивая все слои общества, от фермеров и производителей кормов до широкой общественности [ 3 , 43 , 44 , 45 ]. Пищевые продукты и корма могут быть векторами для вредных бактерий, вирусов или химических веществ, которые ответственны за широкий спектр заболеваний человека и животных [ 46 , 47 ]. Микотоксины являются вторичными метаболитами мицелиальных грибов, которые наносят огромный ущерб сельскому хозяйству во всем мире. АФТ, ОТА, ДОН, ФУМ, ЗЕН и трихотецены в настоящее время являются наиболее часто тестируемыми в отрасли безопасности пищевых продуктов и кормов [ 48 ].

Кроме того, спектр видов грибов, которые продуцируют эти токсины, широк, включая виды Fusarium , Aspergillus и Penicillium . Двухлетнее исследование оценивало загрязнение дрожжами и плесенью сырья и комбикормов; в стартовых комбикормах в 2019 году преобладал род Aspergillus (46,6%), тогда как в 2020 году в большинстве образцов (50%) были выявлены виды родов Penicillium и Cladosporium ; для комбикормов для выращивания и откорма в 2019 году (60% и 72,2% образцов соответственно) и 2020 году (61,5% и 46,6% соответственно) преобладал род Aspergillus [ 49 ]. Из 60 наиболее распространенных микотоксинов, обнаруженных в кормах, 48% были обнаружены в роде Fusarium , 13% – в роде Aspergillus , 8% – в роде Penicillium и 12% – в роде Alternaria [ 50 ].

В исследовании, проведённом Шар и соавторами [ 51 ], было обнаружено, что естественная частота встречаемости токсинов рода Fusarium в комбикормах была аналогична таковой в сырье, используемом для их производства. Частота встречаемости микотоксинов в кормах располагалась в следующем порядке: ЗЕН > ФУМ > ДОН.

В текущем исследовании наиболее распространенным в кормах был микотоксин ЗЕН (93%), за ним следовал ДОН (91%), а затем ОТА, который был обнаружен в 70% всех исследованных образцов. Распространенность микотоксинов в комбикормах для стартеров, ростов и откорма распределилась следующим образом: ЗЕН > ДОН > ОТА.

Хотя существуют сотни микотоксинов, нормативные пределы или рекомендации по максимально допустимым уровням в пищевых продуктах и ​​кормах были установлены лишь для небольшого их числа [ 52 ]. Признание того, что микотоксины влияют на здоровье и продуктивность домашней птицы и свиней, привело к введению правил, устанавливающих максимально допустимые уровни для афлатоксинов, и руководящих рекомендаций (рекомендуемых уровней переносимости) для охратоксинов и небольшого числа фузариотоксинов. Пределы различаются не только в зависимости от типа микотоксина, вида животного, предполагаемого использования, кормовых материалов и кормов, но также в зависимости от регулирующей организации или страны; Европейский союз установил руководящие принципы для кормовых материалов и кормов с различиями в зависимости от возраста животного и стадии производства [ 53 ].

Основные афлатоксины включают афлатоксины B1 , B2 , G1 и G2 и могут продуцироваться отдельными изолятами A. flavus или A. parasiticus [ 25 , 54 , 55 ]. Система быстрого оповещения о пищевых продуктах и ​​кормах (RASFF) сообщила о 5045 и 439 уведомлениях о загрязнении микотоксинами пищевых продуктов и кормов, экспортируемых в страны Европейского Союза по всему миру в период с 2010 по 2019 год соответственно, и примерно 89% уведомлений о загрязнении микотоксинами пищевых продуктов и 98,6% уведомлений о загрязнении кормов были отнесены к загрязнению AFT [ 56 ]. Усреднив результаты, полученные за все пять лет исследования для кормов, протестированных на комбикормовом заводе, максимальное содержание AFT в объединенных образцах стартового, ростового и откормочного кормов составило 2,4 мкг/кг и достигло 5,2 мкг/кг для откормочного корма в 2022 году.

Европейская комиссия установила максимальный уровень для афлатоксина B1 в размере 20 мкг/кг для кормовых материалов, 10 мкг/кг для дополнительных и полнорационных кормов, 5 мкг/кг для комбикормов, предназначенных для кур и молодняка птицы, и 20 мкг/кг для комбикормов для домашней птицы (кроме молодняка) [ 15 ]. В течение многих лет эти токсины не считались проблемой в европейском сельскохозяйственном производстве до начала 2013 года, когда афлатоксины в кукурузе для корма животных из балканского региона вызвали серьезные проблемы в Европе [ 57 , 58 ]. В настоящем исследовании мы не идентифицировали AFT в концентрациях, превышающих максимально допустимый уровень, установленный Европейской комиссией.

В исследовании Греко и соавторов [ 59 ] 44 из 49 образцов комбикорма для цыплят-бройлеров были загрязнены афлатоксинами со средним уровнем 2,685 мкг/кг. Декастелли [ 60 ] проанализировал 616 образцов корма, и АФТ был обнаружен в 44 (7%) образцах. Мартинс и соавторы [ 61 ] проанализировали корм для птицы и обнаружили, что 10% и 22% соответственно были загрязнены АФБ 1 в концентрациях 1–21 мкг/кг. Шегвич Кларич и соавторы [ 62 ] определили АФТ в корме в диапазоне 4,2–10,3 мкг/кг (среднее значение 6,9 мкг/кг) в 4 (31%) из 13 образцов. В нашем исследовании средние уровни загрязнения AFT в образцах комбинированных кормов были ниже результатов, полученных в предыдущих исследованиях.

Текущие исследования выявили новый способ минимизации присутствия микотоксинов в полнорационных кормах для животных, а именно, в случае AFT используются различные комбинации фруктовых выжимок, чтобы минимизировать количество микотоксинов, наиболее распространенными из которых являются лесные ягоды [ 63 ].

DON в основном производится F. graminearum и, в некоторых географических районах, F. culmorum [59]. Средние результаты для DON в текущем исследовании были между 321 и 1740 мкг/кг за все пять лет образцов комбинированных кормов; эти результаты сравнивались с европейскими предельными значениями и не превышали их, но в недавнем исследовании, опубликованном EFSA относительно загрязнения DON в кормах для птицы, с 2017 года EFSA рекомендовало пределы в 600 мкг/кг для бройлеров и индеек, с воздействием на здоровье кишечника и подавлением роста у бройлеров при концентрациях менее 1900 мкг/кг DON в их корме [ 64 ]. Хотя текущие результаты исследований показывают, что уровни DON в образцах кормов для бройлеров были ниже европейских нормативных пределов для комбикормов, рекомендации EFSA подчеркивают необходимость более строгих пределов, разработанных с учетом биологической чувствительности бройлеров. Исследование, проведенное Греко и соавторами [ 59 ], показывает, что 44 из 49 образцов (90%) были загрязнены ДОН (медианой 222 мкг/кг). В исследовании кормов Цегельска-Радзьевска и соавторы [ 37 ] исследовали образцы кормов для птицы и обнаружили загрязнение ДОН во всех образцах в диапазоне 3,1–99,4 мкг/кг (медианой 33,6 мкг/кг). В другом исследовании ДОН был обнаружен в 56% кормов для птицы, а медианная концентрация составила 303 мкг/кг [ 65 ]. Дрихейс и соавторы [ 66 ] проанализировали 72 образца кормов, и ДОН был обнаружен в 54% образцов с максимальной концентрацией 2408 мкг/кг (среднее 433 мкг/кг). В нашем исследовании средние уровни загрязнения DON были выше, чем те, которые обнаружили Cegielska-Radziejewska и др. [ 37 ], и ниже, чем результаты, полученные Labuda и др. и Driehuis и др. [ 65 , 66 ].

FUMs представляют собой группу микотоксинов (в основном FB 1 , FB 2 и FB 3 ), продуцируемых в основном Fusarium verticillioides и F. proliferatum , а кукуруза является основным товаром, пораженным этой группой токсинов [ 25 ]. В настоящем исследовании максимальное содержание FUM в образцах комбикормов для стартеров, ростеров и откормщиков составляло от 300 мкг/кг до 1400 мкг/кг, причем самые высокие значения были выявлены в 2022 году в комбикорме для откорма. Европейская комиссия установила нормативную величину 60 000 мкг/кг для суммы FB 1 и FB 2 в кукурузных кормовых материалах и 20 000 мкг/кг для дополнительных и полнорационных кормов для птицы [ 15 ]. В настоящем исследовании мы не обнаружили FUM в концентрациях выше нормативных значений, установленных Европейской комиссией.

Исследование, проведенное Греко и соавторами [ 59 ], показывает, что фумонизины были обнаружены во всех проанализированных образцах в диапазоне 222–6000 мкг/кг, а Мартинс и соавторы [ 61 ] обнаружили, что 1% из 337 образцов корма для птицы были загрязнены FB 1 в диапазоне 24–34 мкг/кг. В другом исследовании Алмейда и соавторы [ 67 ] проанализировали 127 образцов комбикормов, и FUM был обнаружен в 9% образцов при максимальном содержании 390 мкг/кг (медиана 164 мкг/кг). Другое исследование показало, что FUM в комбикорме для бройлеров имел среднюю концентрацию 304 мкг/кг (максимум 1160 мкг/кг) в 49 из 50 образцов [ 66 ]. Захариасова и соавторы [ 68 ] проанализировали 70 образцов кормов для птицы и свиней, и максимальное содержание FUM составило 10 мкг/кг. В своем исследовании Шегвич Кларич и др. [ 62 ] обнаружили, что 7 из 13 образцов кормов были загрязнены FUM, их среднее содержание составило 2300 мкг/кг, а максимальное содержание – 5000 мкг/кг. В настоящем исследовании средняя концентрация FUM во всех образцах комбикорма оказалась ниже, чем в большинстве результатов, полученных в предыдущих исследованиях.

ОТА — это микотоксин, вырабатываемый в основном P. verrucosum и A. ochraceus [ 25 ]. В текущем исследовании было определено максимальное содержание ОТА в образцах комбинированных стартовых, ростовых и финишных кормов, и полученные значения варьировались от 3,5 мкг/кг до 21,4 мкг/кг для всех лет, включенных в это исследование. Европейская комиссия установила предельное значение 250 мкг/кг для ОТА в кормовых материалах, представленных злаками и зерновыми продуктами, и 100 мкг/кг для дополнительных и комбикормов для птицы [ 15 ]. В исследовании Jaimez et al. [ 69 ] оценили наличие ОТА в 22 образцах кормов для птицы; 43% кормов для птицы были загрязнены ОТА при среднем содержании 0,50 мкг/кг. В исследовании концентрации микотоксинов в кормах для бройлеров Martins et al. [ 61 ] проанализировали 100 образцов кормов для птицы и свиней, и ОТА был обнаружен в одном образце в концентрации 4 мкг/кг. В нашем исследовании средние уровни загрязнения ОТА в образцах комбикормов были выше, чем результаты, представленные Хаймесом и др. [ 69 ], и ниже, чем результаты, представленные Мартинсом и др. [ 61 ].

ZEN является одним из наиболее распространенных микотоксинов, в основном продуцируемым F. graminearum и F. culmorum [ 25 ]. В этом исследовании максимальное содержание ZEN, обнаруженное в объединенных образцах стартового, ростового и финишного корма, было усреднено за все годы и варьировалось от 39,2 мкг/кг до 89,4 мкг/кг. Европейская комиссия установила нормативный уровень 2000 мкг/кг для ZEN в кормовых материалах из злаков и зерновых продуктов и 3000 мкг/кг для побочных продуктов кукурузы. Правовые пределы для ZEN для бройлеров не найдены в правилах Европейской комиссии; поэтому большинство исследований основаны на пределах, основанных на клинических наблюдениях из исследований, проведенных в течение длительного времени на домашней птице; поэтому пределы для ZEN в кормах очень разнообразны и варьируются от 4 до 11 192 мкг/кг [ 70 ]. В текущем исследовании мы не обнаружили ЗЕН в концентрациях, превышающих предельно допустимые значения, наблюдаемые в клинических исследованиях. Хотя уровни микотоксинов, обнаруженные в данном исследовании, были ниже нормативных значений, установленных для кормов для бройлеров, эти ограничения не всегда биологически безопасны. Хроническое воздействие микотоксинов на уровнях ниже нормативных может иметь негативные последствия, такие как иммуносупрессия и нарушение роста.

В исследовании Греко и соавторов [ 59 ] 42 образца комбикорма для цыплят-бройлеров были загрязнены ЗЕН (медиана 50 мкг/кг). В исследовании микотоксинов в комбикорме для цыплят-бройлеров ЗЕН был обнаружен в 1 из 22 образцов в низкой концентрации 0,5 мкг/кг [ 69 ]. Лабуда и соавторы [ 65 ] обнаружили ЗЕН в 88% (44) образцов со средней концентрацией 21 мкг/кг и максимальным содержанием 86 мкг/кг. Дрихейс и соавторы [ 66 ] проанализировали 72 образца комбикорма, и ЗЕН был обнаружен в 28% образцов со средним значением 80 мкг/кг и максимальным уровнем 363 мкг/кг. В образцах комбикорма, проанализированных Мартинсом и соавторами. [ 61 ], 13% образцов были загрязнены ЗЕН на уровне от 104 до 356 мкг/кг. Захариасова и др. [ 68 ] проанализировали в общей сложности 70 образцов комбикорма для бройлеров, и максимальное содержание ЗЕН было обнаружено в 104 г/кг. В нашем исследовании было отмечено, что средние уровни загрязнения ЗЕН в образцах комбикорма для бройлеров были ниже, чем полученные в исследованиях Дрихейса и др., Мартинса и др. и Захариасовой и др. [ 61 , 66 , 68 ].

На севере Румынии, согласно наблюдениям авторов, участвовавших в данном исследовании, а также местным и национальным источникам мониторинга метеорологических явлений в период 2019–2023 гг., повышенная влажность воздуха в 2019–2021 гг. была обусловлена ​​обильными дождями с возросшей периодичностью, что привело к средним уровням влажности в диапазоне от 74 до 76% по сравнению с 2022 и 2023 гг., когда средняя влажность была зафиксирована на уровне 65%.

Зерно, которое может способствовать загрязнению комбикормов микотоксинами, в основном подвержено заражению плесневыми грибами и грибами, продуцирующими микотоксины. Наиболее часто поражаются следующие виды: кукуруза — основной продукт кормления, часто поражаемый грибами родов Fusarium, Aspergillus и Penicillium, которые продуцируют такие микотоксины, как АФТ, ФУМ и ДОН; пшеница — также уязвима к загрязнению микотоксинами, особенно ДОН; ячмень и рожь могут быть заражены, особенно ДОН и ЗЕН.

Метеорологические факторы могли бы объяснить более высокую контаминацию кормового сырья, а позднее и полнорационного комбикорма для бройлеров, как это было отмечено в результатах, полученных в 2019 и 2020 годах. Однако следует учитывать, что некоторые микотоксины, такие как АФТ, хотя и предпочитают высокую влажность, как было подтверждено некоторыми исследованиями, также накапливаются в периоды продолжительной засухи [ 71 , 72 ]. Длительные периоды засухи влияют на естественные защитные механизмы кормовых растений, что делает невозможным формирование защитных структур против патогенов и, таким образом, предотвращение размножения микотоксинов.

Совместное появление

Совместное присутствие микотоксинов в комбикормах выявляется чаще всего, поскольку присутствие микотоксинов в каждом из видов сырья, используемых при производстве комбикормов, весьма вероятно; поэтому современные исследования сосредоточены на изучении синергических или антагонистических эффектов микотоксинов [ 10 , 73 ].

Данные, полученные в текущем исследовании, подчеркивают сопутствующую встречаемость микотоксинов; так, в 26% проанализированных образцов было подтверждено сопутствующее присутствие пяти изученных микотоксинов. С другой стороны, комбинации АФТ, ФУМ, ОТА и АФТ, ФУМ и ЗЕН были наименее частыми, составляя всего 0,2% случаев в образцах комбикормов, проанализированных за 5 лет. В исследовании 2019 года, проведенном в Испании, Арройо-Мансанарес и соавторы [ 74 ] продемонстрировали сопутствующую встречаемость более восьми микотоксинов в 2,19% образцов комбикормов для свиней; они также подчеркивают, что в 98,7% исследованных образцов они обнаружили по крайней мере два микотоксина, присутствующих одновременно.

Кроме того, в случае изученных образцов комбикормов, как мы отметили на рисунке 1 , в большинстве случаев (38,51%) мы выявили сопутствующее присутствие четырёх микотоксинов. Грубер Домингер и др. [ 75 ] объясняют, что, по сути, сценарий совместного присутствия микотоксинов в корме является наиболее правдоподобным.

Исследования по оценке загрязнения микотоксинами комбикормов для цыплят-бройлеров в Румынии ограничены, и высокая частота загрязнения, наблюдаемая в данном исследовании, подчеркивает важность улучшения контроля микотоксинов по всей стране. В период с 2019 по 2023 год, когда были отобраны проанализированные образцы на заводе по производству комбикормов в Румынии, уровни загрязнения образцов были ниже максимально допустимых норм Европейского союза; однако мы считаем необходимым установить и применять биологически значимые нормативные пороговые значения и пределы, которые могли бы обеспечить здоровье птицы. Кроме того, было показано, что распределение и наличие микотоксинов варьировались от года к году в связи с изменением климатических условий.

Совместное присутствие микотоксинов широко выявлено; даже несмотря на низкие уровни, необходимо расширить знания об их совокупном воздействии на здоровье животных и человека.

Что касается будущих направлений исследований в Румынии, то их следует расширить, включив в них больше комбикормовых заводов, кормовых материалов и типов комбикормов, чтобы разработать практическое руководство, обеспечивающее всесторонний обзор рисков в пищевой цепочке. В частности, также актуально изучить возможность переноса микотоксинов в продукты животного происхождения и проанализировать комбинированное воздействие микотоксинов на здоровье животных, включая синергические и антагонистические эффекты между ними.

1.    Lorenzo, J.M.; Munekata, P.; Domínguez, R.; Pateiro, M.; Saraiva, J.; Franco Ruiz, D. Chapter 3—Main Groups of Microorganisms of Relevance for Food Safety and Stability: General Aspects and Overall Description. In Innovative Technologies for Food Preservation: Inactivation of Spoilage and Pathogenic Microorganisms; Academic Press: Cambridge, MA, USA, 2018; pp. 53–107. [Google Scholar]

2.    Marin, D.E.; Pistol, G.C.; Procudin, C.V.; Taranu, I. Co-Contamination of Food and Feed with Mycotoxin and Bacteria and Possible Implications for Health. Agriculture 2022, 12, 1970. [Google Scholar] [CrossRef]

3.    Pleadin, J.; Frece, J.; Markov, K. Mycotoxins in food and feed. Adv. Food Nutr. Res. 2019, 89, 297–345. [Google Scholar] [CrossRef]

4.    Zeece, M. Food additives. In Introduction to the Chemistry of Food; Academic Press: Cambridge, MA, USA, 2020; pp. 251–311. [Google Scholar] [CrossRef]

5.    Richard, J.L. Mycotoxins—An overview. In Romer Labs’ Guide to Mycotoxins; Binder, E.M., Krska, R., Eds.; Anytime Publishing Services: Leicestershire, UK, 2015; pp. 1–48. [Google Scholar]

6.    Marroquín-Cardona, A.G.; Johnson, N.M.; Phillips, T.D.; Hayes, A.W. Mycotoxins in a changing global environment—A review. Food Chem. Toxicol. 2014, 69, 220–230. [Google Scholar] [CrossRef]

7.    Eskola, M.; Kos, G.; Elliott, C.T.; Hajšlová, J.; Mayar, S.; Krska, R. Worldwide contamination of food-crops with mycotoxins: Validity of the widely cited ‘FAO estimate’ of 25%. Crit. Rev. Food Sci. Nutr. 2020, 60, 2773–2789. [Google Scholar] [CrossRef] [PubMed]

8.    Alshannaq, A.; Yu, J.-H. Occurrence, Toxicity, and Analysis of Major Mycotoxins in Food. Int. J. Environ. Res. Public Health 2017, 14, 632. [Google Scholar] [CrossRef]

9.    Anukul, N.; Vangnai, K.; Mahakarnchanakul, W. Significance of regulation limits in mycotoxin contamination in Asia and risk management programs at the national level. J. Food Drug Anal. 2013, 21, 227–241. [Google Scholar] [CrossRef]

10. Pinotti, L.; Ottoboni, M.; Giromini, C.; Dell’Orto, V.; Cheli, F. Mycotoxin Contamination in the EU Feed Supply Chain: A Focus on Cereal Byproducts. Toxins 2016, 8, 45. [Google Scholar] [CrossRef] [PubMed]

11. Matei, M.; Zaharia, R.; Petrescu, S.-I.; Radu-Rusu, C.G.; Simeanu, D.; Mierlita, D.; Pop, I.M. Persistent Organic Pollutants (POPs): A Review Focused on Occurrence and Incidence in Animal Feed and Cow Milk. Agriculture 2023, 13, 873. [Google Scholar] [CrossRef]

12. Probst, C.; Njapau, H.; Cotty, P.J. Outbreak of an acute aflatoxicosis in Kenya in 2004: Identification of the causal agent. Appl. Environ. Microb. 2007, 73, 2762–2764. [Google Scholar] [CrossRef] [PubMed]

13. Galarza-Seeber, R.; Latorre, J.D.; Bielke, L.R.; Kuttappan, V.A.; Wolfenden, A.D.; Hernandez-Velasco, X.; Merino-Guzman, R.; Vicente, J.L.; Donoghue, A.; Cross, D.; et al. Leaky gut and mycotoxins: Aflatoxin B1 does not increase gut permeability in broiler chickens. Front. Vet. Sci. 2016, 3, 10. [Google Scholar] [CrossRef] [PubMed]

14. D’Mello, J.P.E. Contaminants and toxins in animal feeds. In Assessing Quality and Safety of Animal Feeds; Jutzi, S., Ed.; Food and Agriculture Organization: Rome, Italy, 2004; Volume 160, pp. 107–128. [Google Scholar]

15. Commission Regulation (EU) No 574/2011 of 16 June 2011 amending Annex I to Directive 2002/32/EC of the European Parliament and of the Council as regards maximum levels for nitrite, melamine, Ambrosia spp. and carry-over of certain coccidiostats and histomonostats and consolidating Annexes I and II thereto. Off. J. Eur. Union 2011, L159, 7–24.

16. Commission Recommendation of 17 August 2006 on the presence of deoxynivalenol, zearalenone, ochratoxin A, T-2 and HT-2 and fumonisins in products intended for animal feeding. Off. J. Eur. Union 2006, L229, 7–9.

17. Reddy, K.R.N.; Salleh, B.; Saad, B.; Abbas, H.K.; Abel, C.A.; Shier, W.T. An overview of mycotoxin contamination in foods and its implications for human health. Toxin Rev. 2010, 29, 3–26. [Google Scholar] [CrossRef]

18. Ismail, A.; Gonçalves, B.L.; de Neeff, D.V.; Ponzilacqua, B.; Coppa, C.F.; Hintzsche, H.; Sajid, M.; Cruz, A.G.; Corassin, C.H.; Oliveira, C.A.F. Aflatoxin in foodstuffs: Occurrence and recent advances in decontamination. Food Res. Int. 2018, 113, 74–85. [Google Scholar] [CrossRef] [PubMed]

19. Rushing, B.R.; Selim, M.I. Aflatoxin B1: A review on metabolism, toxicity, occurrence in food, occupational exposure, and detoxification methods. Food Chem. Toxicol. 2019, 124, 81–100. [Google Scholar] [CrossRef]

20. Guo, H.; Wang, P.; Liu, C.; Chang, J.; Yin, Q.; Wang, L.; Jin, S.; Zhu, Q.; Lu, F. Compound Mycotoxin Detoxifier Alleviating Aflatoxin B1 Toxic Effects on Broiler Growth Performance, Organ Damage and Gut Microbiota. Poult. Sci. 2023, 102, 102434. [Google Scholar] [CrossRef] [PubMed]

21. Paneru, D.; Sharma, M.K.; Shi, H.; Wang, J.; Kim, W.K. Aflatoxin B1 Impairs Bone Mineralization in Broiler Chickens. Toxins 2024, 16, 78. [Google Scholar] [CrossRef] [PubMed]

22. Sobrova, P.; Adam, V.; Vasatkova, A.; Beklova, M.; Zeman, L.; Kizek, R. Deoxynivalenol and its toxicity. Interdiscip. Toxicol. 2010, 3, 94–99. [Google Scholar] [CrossRef] [PubMed]

23. Wan, S.; Sun, N.; Li, H.; Khan, A.; Zheng, X.; Sun, Y.; Fan, R. Deoxynivalenol damages the intestinal barrier and biota of the broiler chickens. BMC Vet. Res. 2022, 18, 311. [Google Scholar] [CrossRef]

24. Peng, W.X.; Marchal, J.L.M.; Van der Poel, A.F.B. Strategies to prevent and reduce mycotoxins for compound feed manufacturing. Anim. Feed. Sci. Technol. 2018, 237, 129–153. [Google Scholar] [CrossRef]

25. Richard, J.L. Some major mycotoxins and their mycotoxicoses—An overview. Int. J. Food Microbiol. 2007, 119, 3–10. [Google Scholar] [CrossRef]

26. Anttila, A.; Bhat, R.V.; Bond, J.A.; Borghoff, S.J.; Bosch, F.X.; Carlson, G.P.; Castegnaro, M.; Cruzan, G.; Gelderblom, W.C.A.; Hass, U.; et al. International Agency for Research on Cancer (IARC) Monographs on the Evaluation of Carcinogenic Risks to Humans: Some Traditional Herbal Medicines, Some Mycotoxins, Naphthalene and Styrene; IARC Press: Lyon, France, 2002; Volume 82, p. 367. [Google Scholar]

27. Völkel, I.; Schröer-Merker, E.; Czerny, C.P. The carry-over of mycotoxins in products of animal origin with special regard to its implications for the European food safety legislation. Food Nutr. Sci. 2011, 2, 852–867. [Google Scholar] [CrossRef]

28. El Khoury, A.; Atoui, A. Ochratoxin A: General overview and actual molecular status. Toxins 2010, 2, 461–493. [Google Scholar] [CrossRef] [PubMed]

29. World Health Organization (WHO); International Agency for Research on Cancer (IARC). Some Naturally Occurring Substances: Food Items and Constituents, Heterocyclic Aromatic Amines and Mycotoxins; IARC Monographs on the Evaluation of the Carcinogenic Risk of Chemicals to Humans; IARC Publications: Lyon, France, 1993; p. 56. [Google Scholar]

30. Gaffoor, I.; Trail, F. Characterization of two polyketide synthase genes involved in zearalenone biosynthesis in Gibberella zeae. Appl. Environ. Microbiol. 2006, 72, 1793–1799. [Google Scholar] [CrossRef]

31. Pop, I.M.; Halga, P.; Avarvarei, T. Animal nutrition and feeding. In Nutritia si Alimentatia Animalelor; Tipo Moldova: Iasi, Romania, 2006. [Google Scholar]

32. European Food Safety Authority (EFSA) Panel on Contaminants in the Food Chain. Scientific Opinion on the risks for public health related to the presence of zearalenone in food. EFSA J. 2011, 9, 2197. [Google Scholar] [CrossRef]

33. Pop, I.M. Food quality and safety management. In Managementul Calitatii si Sigurantei Alimentelor; Tipo Moldova: Iasi, Romania, 2022. [Google Scholar]

34. Lapusneanu, D.M.; Simeanu, D.; Radu-Rusu, C.; Pop, C.; Postolache, A.N.; Pop, I.M. Case study on the prevention and control of mycotoxin contamination in a feed mill unit. J. Hyg. Eng. Des. JHED 2020, 33, 41–47. [Google Scholar]

35. Regulation (EC) No 183/2005 of the European Parliament and of the Council of 12 January 2005 Laying down Requirements for Feed Hygiene. Off. J. Eur. Union 2005, L35, 1–22.

36. Granados-Chinchilla, F.; Valenzuela-Martínez, C.; García-Murillo, B.; Aguilar-Madrigal, D.; Redondo-Solano, M.; Molina, A. Microbiological safety and presence of major mycotoxins in animal feed for laboratory animals in a developing country: The case of Costa Rica. Animals 2021, 11, 2389. [Google Scholar] [CrossRef]

37. Cegielska-Radziejewska, R.; Stuper-Szablewska, K.; Szablewski, T. Microflora and mycotoxin contamination in poultry feed mixtures from western Poland. Ann. Agric. Environ. Med. AAEM 2013, 20, 30–35. [Google Scholar]

38. Smith, M.-C.; Madec, S.; Coton, E.; Hymery, N. Natural Co-Occurrence of Mycotoxins in Foods and Feeds and Their in vitro Combined Toxicological Effects. Toxins 2016, 8, 94. [Google Scholar] [CrossRef]

39. SR EN ISO 9001:2015; Quality Management Systems—Requirements. Romanian Standards Association: Bucharest, Romania, 2015.

40. SR EN ISO 22000:2019; Food Safety Management Systems—Requirements for Any Organization in the Food Chain. Romanian Standards Association: Bucharest, Romania, 2019.

41. SR ISO 45001:2018; Occupational Health and Safety Management Systems—Requirements with Guidance for Use. Romanian Standards Association: Bucharest, Romania, 2018.

42. Rayat, C.S. Applications of Microsoft Excel in Statistical Methods. In Statistical Methods in Medical Research, 1st ed.; Rayat, C.S., Ed.; Springer: Singapore, 2018; pp. 139–146. [Google Scholar]

43. Abdolshahi, A.; Behdad Shokrollahi, Y. Chapter 2—Food contamination. In Mycotoxins and Food Safety; Suna, S., Ed.; IntechOpen: Rijeka, Croatia, 2020. [Google Scholar]

44. Guerre, P. Mycotoxin and Gut Microbiota Interactions. Toxins 2020, 12, 769. [Google Scholar] [CrossRef] [PubMed]

45. Stanley, D.; Bajagai, Y.S. Feed Safety and the Development of Poultry Intestinal Microbiota. Animals 2022, 12, 2890. [Google Scholar] [CrossRef] [PubMed]

46. Todd, E.C.D. Foodborne Diseases: Overview of Biological Hazards and Foodborne Diseases. In Encyclopedia of Food Safety; Academic Press: Cambridge, MA, USA, 2014; pp. 221–242. [Google Scholar] [CrossRef]

47. Cimbalo, A.; Alonso Garrido, M.; Font, G.; Manyes, L. Toxicity of mycotoxins in vivo on vertebrate organisms: A review. Food Chem. Toxicol. 2020, 137, 111161. [Google Scholar] [CrossRef] [PubMed]

48. Abrunhosa, L.; Morales, H.; Soares, C.; Calado, T.; Vila-Cha, A.S.; Pereira, M.; Venancio, A. A Review of Mycotoxins in Food and Feed Products in Portugal and Estimation of Probable Daily Intakes. Crit. Rev. Food Sci. Nutr. 2016, 56, 249–265. [Google Scholar] [CrossRef] [PubMed]

49. Lăpușneanu, D.M.; Simeanu, D.; Radu-Rusu, C.-G.; Zaharia, R.; Pop, I.M. Microbiological Assessment of Broiler Compound Feed Production as Part of the Food Chain—A Case Study in a Romanian Feed Mill. Agriculture 2023, 13, 107. [Google Scholar] [CrossRef]

50. Khoshal, A.K.; Novak, B.; Martin, P.G.P.; Jenkins, T.; Neves, M.; Schatzmayr, G.; Oswald, I.P.; Pinton, P. Co-Occurrence of DON and Emerging Mycotoxins in Worldwide Finished Pig Feed and Their Combined Toxicity in Intestinal Cells. Toxins 2019, 11, 727. [Google Scholar] [CrossRef]

51. Shar, Z.H.; Shar, H.H.; Jatoi, A.; Sherazi, S.T.H.; Mahesar, S.A.; Khan, E.; Phanwar, Q.K. Natural co-occurrence of Fusarium toxins in poultry feed and its ingredients. J. Consum. Prot. Food Saf. 2020, 15, 341–350. [Google Scholar] [CrossRef]

52. Bennett, J.W.; Klich, M. Mycotoxins. Clin. Microbiol. Rev. 2003, 16, 497–516. [Google Scholar] [CrossRef] [PubMed]

53. Guerre, P. Worldwide Mycotoxins Exposure in Pig and Poultry Feed Formulations. Toxins 2016, 8, 350. [Google Scholar] [CrossRef]

54. Rawal, S.; Kim, J.E.; Coulombe, R., Jr. Aflatoxin B1 in poultry: Toxicology, metabolism and prevention. Res. Vet. Sci. 2010, 89, 325–331. [Google Scholar] [CrossRef] [PubMed]

55. Ochieng, P.E.; Scippo, M.; Kemboi, D.C.; Croubels, S.; Okoth, S.; Kang’ethe, E.K.; Doupovec, B.; Gathumbi, J.K.; Lindahl, J.F.; Antonissen, G. Mycotoxins in Poultry Feed and Feed Ingredients from Sub-Saharan Africa and Their Impact on the Production of Broiler and Layer Chickens: A Review. Toxins 2021, 13, 633. [Google Scholar] [CrossRef]

56. Alshannaq, A.; Yu, J.-H. Analysis of E.U. Rapid Alert System (RASFF) Notifications for Aflatoxins in Exported U.S. Food and Feed Products for 2010–2019. Toxins 2021, 13, 90. [Google Scholar] [CrossRef]

57. De Rijk, T.C.; Van Egmond, H.P.; Van der Fels-Klerx, H.J.; Herbes, R.; De Nijs, M.; Samson, R.A.; Slate, A.B.; Van der Spiegel, M. A study of the 2013 Western European issue of aflatoxin contamination of maize from the Balkan area. World Mycotoxin J. 2015, 8, 641–651. [Google Scholar] [CrossRef]

58. Kosicki, R.; Błajet-Kosicka, A.; Grajewski, J.; Twarużek, M. Multiannual mycotoxin survey in feed materials and feeding stuffs. Anim. Feed Sci. Technol. 2016, 215, 165–180. [Google Scholar] [CrossRef]

59. Greco, M.V.; Franchi, M.L.; Rico Golba, S.L.; Pardo, A.G.; Pose, G.N. Mycotoxins and mycotoxigenic fungi in poultry feed for food-producing animals. Sci. World J. 2014, 2014, 968215. [Google Scholar] [CrossRef] [PubMed]

60. Decastelli, L.; Lai, J.; Gramaglia, M.; Monaco, A.; Nachtmann, C.; Oldano, F.; Ruffer, M.; Sezian, A.; Bandirola, C. Aflatoxins occurrence in milk and feed in Northern Italy during 2004–2005. Food Control 2007, 18, 1263–1266. [Google Scholar] [CrossRef]

61. Martins, H.M.; Marques, M.; Almeida, I.; Guerra, M.M.; Bernardo, F. Mycotoxins in feedstuffs in Portugal: An overview. Mycotoxin Res. 2008, 24, 19–23. [Google Scholar] [CrossRef] [PubMed]

62. Šegvić Klarić, M.; Cvetnić, Z.; Pepeljnjak, S.; Kosalec, I. Co-occurrence of Aflatoxins, Ochratoxin A, Fumonisins, and Zearalenone in Cereals and Feed, Determined by Competitive Direct Enzyme-Linked Immunosorbent Assay and Thin-Layer Chromatography. Arch. Ind. Hyg. Toxicol. 2009, 60, 427–433. [Google Scholar] [CrossRef]

63. Mierlita, D.; Teușdea, A.C.; Matei, M.; Pascal, C.; Simeanu, D.; Pop, I.M. Effect of Dietary Incorporation of Hemp Seeds Alone or with Dried Fruit Pomace on Laying Hens’ Performance and on Lipid Composition and Oxidation Status of Egg Yolks. Animals 2024, 14, 750. [Google Scholar] [CrossRef] [PubMed]

64. EFSA Panel on Contaminants in the Food Chain (CONTAM); Schrenk, D.; Bignami, M.; Bodin, L.; Chipman, J.K.; Del Mazo, J.; Grasl-Kraupp, B.; Hogstrand, C.; Hoogenboom, L.R.; Leblanc, J.C.; et al. Risk assessment of aflatoxins in food. EFSA J. 2020, 18, e06040. [Google Scholar] [CrossRef]

65. Labuda, R.; Parich, A.; Berthiller, F.; Tančinová, D. Incidence of trichothecenes and zearalenone in poultry feed mixtures from Slovakia. Int. J. Food Microbiol. 2005, 105, 19–25. [Google Scholar] [CrossRef] [PubMed]

66. Driehuis, F.; Spanjer, M.C.; Scholten, J.M.; Te Giffel, M.C. Occurrence of mycotoxins in feedstuffs of dairy cows and estimation of total dietary intakes. J. Dairy Sci. 2008, 91, 4261–4271. [Google Scholar] [CrossRef] [PubMed]

67. Almeida, I.; Martins, H.M.; Santos, S.; Costa, J.M.; Bernardo, F. Co-occurrence of mycotoxins in swine feed produced in Portugal. Mycotoxin Res. 2011, 27, 177–181. [Google Scholar] [CrossRef]

68. Zachariasova, M.; Dzuman, Z.; Veprikova, Z.; Hajkova, K.; Jiru, M.; Vaclavikova, M.; Zachariasova, A.; Pospichalova, M.; Florian, M.; Hajslova, J. Occurrence of multiple mycotoxins in European feedingstuffs, assessment of dietary intake by farm animals. Anim. Feed Sci. Technol. 2014, 193, 124–140. [Google Scholar] [CrossRef]

69. Jaimez, J.; Fente, C.A.; Franco, C.M.; Cepeda, A.; Vazquez, B.I. A survey of the fungal contamination and presence of ochratoxin A and zearalenone on Spanish feed and raw materials. J. Sci. Food Agric. 2004, 84, 832–840. [Google Scholar] [CrossRef]

70. Liu, J.; Applegate, T. Zearalenone (ZEN) in Livestock and Poultry: Dose, Toxicokinetics, Toxicity and Estrogenicity. Toxins 2020, 12, 377. [Google Scholar] [CrossRef] [PubMed]

71. Liu, C.; Van der Fels-Klerx, H.J. Quantitative Modeling of Climate Change Impacts on Mycotoxins in Cereals: A Review. Toxins 2021, 13, 276. [Google Scholar] [CrossRef]

72. Medina, A.; Gilbert, M.K.; Mack, B.M.; OBrian, G.R.; Rodríguez, A.; Bhatnagar, D.; Payne, G.; Magan, N. Interactions between water activity and temperature on the Aspergillus flavus transcriptome and aflatoxin B1 production. Int. J. Food Microbiol. 2017, 256, 36–44. [Google Scholar] [CrossRef] [PubMed]

73. Muñoz-Solano, B.; González-Peñas, E. Co-Occurrence of Mycotoxins in Feed for Cattle, Pigs, Poultry, and Sheep in Navarra, a Region of Northern Spain. Toxins 2023, 15, 172. [Google Scholar] [CrossRef] [PubMed]

74. Arroyo-Manzanares, N.; Rodríguez-Estévez, V.; Arenas-Fernández, P.; García-Campaña, A.M.; Gámiz-Gracia, L. Occurrence of Mycotoxins in Swine Feeding from Spain. Toxins 2019, 11, 342. [Google Scholar] [CrossRef]

75. Gruber-Dorninger, C.; Jenkins, T.; Schatzmayr, G. Global Mycotoxin Occurrence in Feed: A Ten-Year Survey. Toxins 2019, 11, 375. [Google Scholar] [CrossRef] [PubMed]

Lăpușneanu DM, Petrescu S-I, Radu-Rusu C-G, Matei M, Pop IM. Mycotoxicological Assessment of Broiler Compound Feed: A Multi-Year Analysis of Five Mycotoxins in a Romanian Feed Mill. Agriculture. 2025; 15(1):84.

Перевод статьи «Mycotoxicological Assessment of Broiler Compound Feed: A Multi-Year Analysis of Five Mycotoxins in a Romanian Feed Mill» авторов Lăpușneanu DM, Petrescu S-I, Radu-Rusu C-G, Matei M, Pop IM., оригинал доступен по ссылке. Лицензия: CC BY. Изменения: переведено на русский язык